产品货号：
GS0116
中文名称：
质粒DNA小量提取试剂盒(96孔板)
英文名称：
96Wells Plasmid DNA Mini-Preps Kit，2mL
产品规格：
10次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒是将SgPrep柱式质粒DNA小量抽提试剂盒改进，与96孔吸附柱结合，一次可同时处理96个不同样品，快速获得大批量高纯质粒DNA。
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- 新型裂解染料Visualysis让裂解过程可视化，实现质粒得率最大化。
- 操作快速简单，60分钟之内可完成96个不同样品的提取。
- 质粒浓度大、纯度高，可直接用于后续实验。
| 组分 | 规格 |
| Buffer P1 | 10×28mL |
| Buffer P2 | 10×28mL |
| Buffer P3 | 10×40mL |
| Buffer DW1 | 10×50mL |
| Wash Solution | 10×24mL |
| Elution Buffer | 10×10mL |
| RNase A | 10×420μL |
| Visualysis | 10×120μL |
| 96 Well Plate | 10块 |
| Deep Well Collection Plate | 20块 |
| 96 Storage Plate | 10块 |
| Sealing Film | 30张 |
- 试剂盒于常温运输，未开启的试剂盒可以于室温（15～25℃）保存，有效期见包装。加入RNase A后，Buffer P1请存于2～8℃保存，有效期为半年。长期存放请置于2～8℃。
- Buffer P3和Buffer DW1中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
- 自备材料：低速离心机、无水乙醇等。
- 试剂盒初次开启，将RNase A全部加入至Buffer P1中，混匀后在瓶身做好标记，储存于2～8℃，有效期为6个月。
- 按瓶身标签说明在Wash Solution中加入相应量的无水乙醇（乙醇终浓度为80%），混匀后在瓶身做好标记。于室温密封保存。
- 每次使用前请检查Buffer P2和Buffer P3是否出现沉淀，如有沉淀，请于37℃溶解沉淀，待冷却至室温后使用。
- 在含合适抗生素的培养基中接种目标菌株，于37℃摇床充分振荡培养12～16小时。
- 菌液状态对质粒得率非常关键，请用不超过容器容量1/4体积的培养基进行培养。
- 处于生长平台期的菌体用于质粒抽提得率最高，过度培养可能导致DNA降解。
- 菌液状态对质粒得率非常关键，请用不超过容器容量1/4体积的培养基进行培养。
- 对于高拷贝质粒，取2mL菌液分别加入Deep Well Collection Plate中，于室温，5000×g离心2min收集菌体，倒尽或吸干培养基。
- 对于高拷贝质粒，从5mL过夜菌液中通常可以获得超过20μg质粒DNA，不推荐使用更大的菌液量。
- 对于低拷贝质粒，如果使用更多的菌液，则同一个样品分多次收集，每孔不超过5mL，分别裂解。
- 对于高拷贝质粒，从5mL过夜菌液中通常可以获得超过20μg质粒DNA，不推荐使用更大的菌液量。
- 在菌体沉淀中加入250μL Buffer P1，吸打至彻底悬浮菌体。
- Buffer P1首次使用时请检查是否已加入RNase A。
- 一定要彻底悬浮菌体，否则影响得率和质量。
- 如果使用Visualysis，则在加入250μL P1后再加入1μL Visualysis，振荡混匀。
- Visualysis需在临用前加入，直接加入到Buffer P1中出现浑浊为正常现象。
- Buffer P1首次使用时请检查是否已加入RNase A。
- 加入250μL Buffer P2，用Sealing Film封口后立即温和颠倒Deep Well Collection Plate 5～10次混匀，室温静置2～4min。
- 裂解时间与菌量相关，菌量多则适当延长时间，最长不能超过5分钟。
- 如果同时操作多个样品，每加入一管混匀一管，不要采用全部加入一起混匀的方法，计时从第一管样品加入开始。
- 如果使用了Visualysis，则溶液呈现均匀的蓝色表示混匀良好，如果出现白色团块，则提示菌体可能过量，宜选用更少的菌液重新开始。
- 混匀后应短暂低速离心后再将Sealing Film取下，避免样品间交叉污染。
- 裂解时间与菌量相关，菌量多则适当延长时间，最长不能超过5分钟。
- 加入350μL Buffer P3，用Sealing Film封口后立即温和颠倒Deep Well Collection Plate 5～10次充分混匀。
- 加入Buffer P3后，离心管中会立即出现大量白色絮状沉淀，如果使用了Visualysis，则溶液由蓝色重新变为无色，有蓝色残留提示混匀不彻底，继续混合至蓝色全部消失。
- 如果起始菌液较多，混匀后室温静置2分钟以彻底去除RNA。
- 加入Buffer P3后，离心管中会立即出现大量白色絮状沉淀，如果使用了Visualysis，则溶液由蓝色重新变为无色，有蓝色残留提示混匀不彻底，继续混合至蓝色全部消失。
- 于离心机最大转速离心10min。将96 Well Plate套放于Deep Well Collection Plate上，然后将上清全部小心移入96 Well Plate所对应的孔中，5000×g离心30sec。倒掉Deep Well Collection Plate中的液体，将96 Well Plate套放于同一个Deep Well Collection Plate中。
- 96 Well Plate的最大有效容积为750μL，如果裂解液较多，可以重复该步骤直到至所有裂解液流过96 Well Plate。
- （可选步骤）将96 Well Plate套放于Deep Well Collection Plate上，然后向96 Well Plate所对应的孔中加入500μL去蛋白液Buffer DW1，5000×g离心30sec。倒掉Deep Well Collection Plate中的液体，将96 Well Plate套放于同一个Deep Well Collection Plate中。
- 对于End A+宿主菌，如BL21，HB101，JM系列等，此步不能省略。
- 对于End A-宿主菌，如DH5α，TOP10等，此步可以省略，但进行该步骤将进一步降低蛋白残留量。
- 对于End A+宿主菌，如BL21，HB101，JM系列等，此步不能省略。
- 向96 well plate所对应的孔中加入500μL Wash Solution，5000×g离心30sec。倒掉Deep Well Collection Plate中的液体，将96 Well Plate套放于同一个Deep Well Collection Plate中。
- Wash Solution首次使用前请检查是否已加入正确量的无水乙醇。
- 重复步骤8一次。
- 将96 Well Plate套放于同一个Deep Well Collection Plate中，5000×g离心2min。
- 此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
- 50℃放置5～8分钟，确保残留的乙醇完全挥发。
- 此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
- 将96 Well Plate套放于96 Storage Plate上，然后在所对应的吸附膜中央加入50～100μL Elution Buffer，室温静置1～2min，5000×g离心1min。将所得到的DNA溶液置于-20℃保存或用于后续试验。
- Elution Buffer为2.5mM Tris-HCl，pH8.5，可以用TE或水（pH> 7.0）代替。
- 将Elution Buffer预热至60℃可以进一步提高得率。
- 如果质粒＞8kb，加入Elution Buffer后，在37～60℃温浴2分钟可以显著提高得率。
- 使用小于40μL的洗脱液可以得到浓度更高的DNA，但得率显著降低。
- Elution Buffer为2.5mM Tris-HCl，pH8.5，可以用TE或水（pH> 7.0）代替。
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